不同剂量驱动蛋白17反义寡核苷酸鞘内注射对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 通过鞘内注射不同剂量驱动蛋白17(kinesin superfamily 17,KIF17)反义寡核苷酸,研究其在骨癌痛小鼠疼痛发生中的作用. 方法 55只雄性C3H/HeJ小鼠,4周～6周龄,体重20 g～25 g.用随机数字表法分为骨癌组(A组,41只)和假手术组(S组,14只).A组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射20μl含约2×105个纤维肉瘤细胞(NCTC2472)的最小必须培养基(α-minimal essence medium,α-MEM)以制备骨癌痛模型,S组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射等体积不含肿瘤细胞的α-MEM.各组小鼠于接种前(base)及接种后第4、7、10、14天进行痛行为学测试,包括自发抬足次数(the number of spontaneous flinches,NSF)和机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).每组每个时间点各取1只小鼠断头处死,取L3-5脊髓,用免疫印迹法(Western blot)测定KIF17蛋白含量.在接种后第14天,再将剩余A组小鼠按随机数字表法分为KIF17反义寡核苷酸2.5 μg组(A1组)、KIF17反义寡核苷酸5.0 μg组(A2组)、KIF17反义寡核苷酸10.0 μg组(A3组)以及对照组(AC组),每组9只.A1组～A3组小鼠分别鞘内给予相应剂量KIF17反义寡核苷酸,S组和AC组小鼠鞘内给予生理盐水,注药容积均为5μl.给药结束后2、12、24、36、48 h每个时间点取1只小鼠处死,再行痛行为学测试和脊髓水平KIF17蛋白含量. 结果 与S组[(2.15±0.49)次、(1.80±0.39)g]和基础值[(2.08±0.34)次、(1.88±0.35)g]比较,接种后第14天,A组小鼠NSF显著增加[(11.95±0.78)次],PWMT显著降低[(0.34±0.11)g](P＜0.05);同时A组小鼠脊髓水平KIF17表达增多;与AC组和给药前比较,A1组小鼠在给药后2、12h和24 h,NSF[2 h(4.80±0.40)次]减少,PWMT[2 h(0.95±0.33)g]升高(P＜0.05),A2组和A3组小鼠在给药后2、12、24 h和36 h,NSF[2 h(2.35±0.26)、(2.53±0.21)次]减少,PWMT[2 h(1.70±0.32)、(1.73±0.40)g]升高(P＜0.05),且与A1组比较,A2组和A3组小鼠痛行为学的改善更明显,A2组与A3组各时间点小鼠NSF和PWMT比较,差异无统计学意义(P＞0.05);给药后2h,A1组～A3组小鼠脊髓水平KIF17表达减少. 结论 骨癌痛小鼠脊髓水平KIF17表达上调,鞘内给予KIF17反义寡核苷酸能有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学,其镇痛效果和作用时间与剂量有关.

Effect of intrathecal different dose of kinesin superfamily 17 on the development of bone cancer pain in mice