小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体的构建

目的 构建小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体，为建立TDO2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法 根据CRISPR/Cas9技术原理，设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体，以TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区，在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件，建立条件性敲除TDO2第3号外显子的条件性基因打靶载体。将CRISPR/Cas9复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中，获得阳性F0小鼠，再将阳性F0代小鼠与C57BL/6小鼠交配获得F1代小鼠，并经PCR和基因测序鉴定F1代小鼠基因型。结果 结果证实所构建的TDO2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求，成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2^em1Cflox/Gpt小鼠。结论 成功构建了小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体，为后续进一步构建TDO2基因条件敲除小鼠奠定了基础。