| 青天葵总DNA的提取与随机扩增多态性DNA反应条件的建立 |
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| 引用本文： | 杜勤,魏智强,田军.青天葵总DNA的提取与随机扩增多态性DNA反应条件的建立[J].时珍国医国药,2009,20(6). |
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| 作者姓名： | 杜勤 魏智强 田军 |
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| 作者单位： | 广州中医药大学中药学院,广东广州,510405 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金，广东省科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA(RAPD)反应.方法 采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品,通过正交设计和均匀设计,改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA.结果 使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA,药材叶片含杂质较多,但都能用于RAPD.反应体系为:缓冲液2.0 μ1,0.5 μl dNTP(各2.5 mmol·L-1),0.8 μl Mg2+(25 mmol·L-1),0.5 μl引物(20 pmol·μl-1),0.2 μl Taq酶(5U·μ1-1),1 μl DNA(50 ng),1μl BSA(20 mg·ml-1),加双倍蒸馏水至20 μl.扩增程序为:94 ℃预变性3 min;94 ℃变性30 s,40 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,40个循环;72℃延伸5 min.结论 建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系.
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| 关 键 词： | 青天葵 DNA提取 随机扩增多态性DNA 正交设计 均匀设计 |
Extraction of Total DNA from Nervilia fordii and Optimization of RAPD Analysis |
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| DU Qin,WEI Zhi-qiang,TIAN Jun.Extraction of Total DNA from Nervilia fordii and Optimization of RAPD Analysis[J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Research,2009,20(6). |
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| Authors: | DU Qin WEI Zhi-qiang TIAN Jun |
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