特异性扩增技术鉴定龟甲与鳖甲 |
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引用本文: | 李楠,虞平添,焦兆群,陈立群,郑阳,黄学贵,陈红杰,蔡宝昌,杨欢,沈玉萍.特异性扩增技术鉴定龟甲与鳖甲[J].中成药,2018(10). |
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作者姓名: | 李楠 虞平添 焦兆群 陈立群 郑阳 黄学贵 陈红杰 蔡宝昌 杨欢 沈玉萍 |
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作者单位: | 镇江市食品药品监督检验中心;江苏大学药学院;南京海昌中药集团有限公司 |
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摘 要: | 目的基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术。方法根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法、酚仿抽提法从龟甲与鳖甲中提取与纯化DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)对目标片段进行扩增,产物以琼脂糖凝胶电泳分析及凝胶成像系统检测,并根据电泳条带的有无及分子量大小以鉴定真伪。结果龟甲与鳖甲及其常见伪品巴西龟、花龟、佛罗里达鳖的DNA经扩增后分别在120、120、81、105、114 bp处产生条带,且引物间无交叉反应,体现出很强的专属性,5个物种DNA的检出限为1 ng。自制药材、饮片、掺伪品均扩增出与目的片段相一致的条带。在市售样品中,18批龟甲和20批鳖甲经鉴定为正品,2批龟甲药材经鉴定为来源于巴西龟的伪品。结论本文所建立的技术可准确、快速地鉴定龟甲与鳖甲的真伪,有助于监控其产品质量。
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