| 人血管生成抑制素基因的克隆、表达载体构建及纯化 |
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| 引用本文： | 黄梁,李彪,朱承谟. 人血管生成抑制素基因的克隆、表达载体构建及纯化[J]. 上海医学, 2002, 25(10): 615-618 |
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| 作者姓名： | 黄梁 李彪 朱承谟 |
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| 作者单位： | 200025,上海第二医科大学附属瑞金医院外科;200025,上海第二医科大学附属瑞金医院核医学科 |
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| 基金项目： | 上海市科委重点科技项目 (99JC14 0 41) |
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| 摘 要： | 目的 克隆人血管生成抑制素基因 (angiostatin) ,纯化其表达蛋白并初步检测纯化蛋白的生物学活性。方法 用PCR技术从正常成人肝cDNA库扩增出人血管内皮抑素基因 ,将其克隆进 pBluescript中 ,测定其核苷酸序列。构建大肠杆菌分泌性表达载体 pET 2 2b(+) angiostatin 6×His,异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)诱导表达 ,经Ni2 + IDASepharose 6B亲和纯化该表达蛋白 ,并采用血管内皮细胞增殖抑制实验检测其活性。结果 经PCR扩增成功获得 10 5 9bp的人血管生成抑制素基因 ,测序正确 ,在大肠杆菌中表达后 ,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的 10 %。SDS PAGE和WesternBlot显示其相对分子质量为 39× 10 3 。经亲和纯化后的angiostatin 6×His纯度可达 90 % ,得率为 0 .2 5mg/ 10 0ml,并且具有抑制血管内皮细胞增殖的活性 ,达到 5 0 %的抑制率 ,angiostatin 6×His浓度为 80 0ng/ml。 结论 人血管生成抑制素基因的克隆、表达及纯化 ,为采用抗血管生成方法治疗裸鼠肿瘤模型及肿瘤患者的研究奠定了基础
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| 关 键 词： | 人血管生成抑制素 克隆 构建 纯化 |
| 修稿时间： | 2002-08-02 |
Cloning, construction and purification of recombinant human angiostatin gene |
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| HUANG Liang,LI Biao,ZHU Chengmo. Cloning, construction and purification of recombinant human angiostatin gene[J]. Shanghai Medical Journal, 2002, 25(10): 615-618 |
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| Authors: | HUANG Liang LI Biao ZHU Chengmo |
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| Affiliation: | HUANG Liang,LI Biao,ZHU Chengmo. Department of Surgery,Ruijing Hospital,Shanghai Second Medical University,Shanghai 200025,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human angiostatin Cloning Construction Purification |
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