| pEGFP-N1/hIL-1ra重组真核表达载体的构建及其在人牙龈成纤维细胞中的瞬时表达 |
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| 引用本文： | 苏 毅,何雅丽,王子露,李建民,徐 艳.pEGFP-N1/hIL-1ra重组真核表达载体的构建及其在人牙龈成纤维细胞中的瞬时表达[J].南京医科大学学报,2008,28(12):1533. |
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| 作者姓名： | 苏 毅 何雅丽 王子露 李建民 徐 艳 |
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| 作者单位： | 南京医科大学口腔医学研究所，南京医科大学基础医学院 |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金资助项目
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| 摘 要： | 目的:构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞并检测其表达,为牙周炎症的基因治疗提供实验基础。方法:TRIzol法提取人乳腺癌组织总RNA进行RT-PCR,将纯化的扩增产物hIL-1ra与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序正确后将重组体pMD18-T/hIL-1ra与真核表达质粒pEGFP-N1分别进行双酶切,连接后转化感受态细菌E.coliTOP10。将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA瞬时转染人牙龈成纤维细胞,荧光显微镜观察绿色荧光的表达,RT-PCR方法检测其基因的表达。结果:构建的pEGFP-N1/hIL-1ra真核表达载体经PCR及双酶切鉴定均表明人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组。瞬时转染人牙龈成纤维细胞后能观察到绿色荧光,RT-PCR可得到目的片段。结论:成功构建了重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,瞬时转染人牙龈成纤维细胞后检测到其基因水平的表达,为炎性细胞因子拮抗剂基因用于牙周炎抗炎治疗奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 重组人白细胞介素1受体拈抗剂 真核表达载体 瞬时转染 人牙龈成纤维细胞 |
| 收稿时间： | 7/3/2008 12:00:00 AM |
Construction of the eukaryote expression vector carrying encoding gene of human interleukin-1 receptor antagonist and its transient expression in human gingival fibroblast cells |
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| SU Yi,HE Ya-li,WANG Zi-lu,LI Jian-min and XU Yan.Construction of the eukaryote expression vector carrying encoding gene of human interleukin-1 receptor antagonist and its transient expression in human gingival fibroblast cells[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2008,28(12):1533. |
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| Authors: | SU Yi HE Ya-li WANG Zi-lu LI Jian-min and XU Yan |
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| Institution: | SU Yi,HE Ya-li,WANG Zi-lu,LI Jian-min1,XU Yan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rhIL-1ra eukaryote expression vector transient transfection human gingival fibroblast cells |
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