| Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 司英健,张曦,陈幸华,刘耀,高蕾,高力,彭贤贵,光丽霞,王庆余.Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定[J].重庆医学,2007,36(10):927-929. |
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| 作者姓名： | 司英健 张曦 陈幸华 刘耀 高蕾 高力 彭贤贵 光丽霞 王庆余 |
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| 作者单位： | 第三军医大学新桥医院血液科,重庆,400037 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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重庆市自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的构建间隙连接蛋白43（Cx43）和绿色荧光蛋白（GFP）双基因共表达重组腺病毒载体。方法利用PCR方法从真核表达载体pcDNA3.0-Cx43扩增Cx43片断,利用DNA重组技术,将目的基因Cx43克隆至含有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV,然后在BJ5183细胞中将重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体pAd-Cx43-GFP,用PacⅠ单酶切鉴定重组载体;将pAd-Cx43-GFP转入293细胞中包装,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中Cx43表达。结果（1）通过PCR方法从载体pcDNA3.0-Cx43扩增出单一条带,与Cx43片断大小相符;（2）重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后,电泳可见2个大小约为9、1kb条带,证明pAdTrack-Cx43构建成功;（3）同源重组产物pAd-Cx43-GFP经PacⅠ酶切后,电泳可观察到2个大小约为31、4kb左右条带,与预期结果相符,提示同源重组成功;（4）荧光显微镜下观察可见转染pAd-Cx43-GFP后293细胞在培养1-2d即有绿色荧光表达;（5）利用WesternBlot法检测到转染pAd-Cx43-GFP后293细胞中Cx43的表达较未转染组增强。结论Ad-Cx43-GFP重组腺病毒载体构建成功。
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| 关 键 词： | 连接蛋白43 绿色荧光蛋白 同源重组 重组腺病毒载体 构建 |
| 文章编号： | 1671-8348(2007)10-927-03 |
| 修稿时间： | 2006年11月10日 |
Construction and identification of recombinant adenoviral vector co-expressing connexon 43 and green fluorescent protein |
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| SI Ying-jian,ZHANG Xi,CHEN Xing-hua,et al..Construction and identification of recombinant adenoviral vector co-expressing connexon 43 and green fluorescent protein[J].Chongqing Medical Journal,2007,36(10):927-929. |
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| Authors: | SI Ying-jian ZHANG Xi CHEN Xing-hua |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cx43 GFP homologous recombination recombinant adenoviral vector construction |
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