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| 大鼠Smad 7基因真核表达质粒的构建与鉴定 | |
| 引用本文： | 杨小艳,郑勇,李睿,徐丽红,周婷,杨军. 大鼠Smad 7基因真核表达质粒的构建与鉴定[J]. 天津医药, 2008, 36(11) |
| 作者姓名： | 杨小艳 郑勇 李睿 徐丽红 周婷 杨军 |
| 作者单位： | 1. 石河子大学医学院第一附属医院老干一科,832008 2. 石河子大学医学院第一附属医院消化内科,832008 3. 石河子大学医学院第一附属医院中心实验室,832008 |
| 基金项目： | 兵团博士资金资助项目 |
| 摘 要： | 目的：构建并鉴定大鼠Smad7/pcDNA3.1（＋）真核表达质粒,为进一步研究Smad7的抗肝纤维化作用提供实验基础。方法：TRIzol法抽提大鼠肝组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,紫外分光核酸蛋白分析仪测定其浓度与纯度,两步法获取大鼠Smad7cDNA片段,CaCl2法制备感受态细胞,应用EcoRI及XhoI在pcDNA3.1（＋）多克隆位点处进行双酶切,切胶回收载体及目的片段酶切产物,将回收的线性化pcDNA3.1（＋）与Smad7cDNA连接,构建Smad7/pcDNA3.1（＋）重组质粒,转化DH5α大肠杆菌,测序鉴定双酶切证实的阳性克隆。结果：电泳检测RNA的完整性良好,28S约为18S的2倍,A260/A280=1.986,纯度较好,阳性克隆酶切后电泳检测在DNAMarker1.3kb处见Smad7目的片段,5.4kb处见线性化pcDNA3.1（＋）,与预期结果相符,质粒重组成功,并测序证实。结论：大鼠Smad7真核表达质粒构建成功,为进一步单独或联合其他质粒从TGF-β/SMAD信号传导的不同环节干预肝纤维化提供了实验基础。 |
| 关 键 词： | 质粒 DNA结合蛋白质类 肝硬化 克隆,生物 大鼠 |
Construction and Identification of Rat Smad 7 Eukaryotic Expressing Plasmid |
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| YANG Xiaoyan,ZHENG Yong,LI Rui,XU Lihong,ZHOU Ting,YANG Jun. Construction and Identification of Rat Smad 7 Eukaryotic Expressing Plasmid[J]. Tianjin Medical Journal, 2008, 36(11) | |
| Authors: | YANG Xiaoyan ZHENG Yong LI Rui XU Lihong ZHOU Ting YANG Jun |
| Abstract: | |
| Keywords: | plasmid DNA-binding proteins liver cirrhosis cloning organism rats |
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