类风湿关节炎患者Ⅱ型胶原蛋白cDNA基因的克隆及序列分析

目的克隆人Ⅱ型胶原蛋白cDNA（hCⅡcDNA）基因。方法以类风湿关节炎患者关节软骨组织的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增hCⅡcDNA基因,将扩增产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,在LB培养基中培养12～16 h,挑取菌落并接种于LB培养液中,取2μL菌液为模板进行PCR鉴定,PCR结果呈现特异性条带为hCⅡcDNA阳性。对hCⅡcDNA阳性的克隆菌株进行测序。结果克隆基因经测序并通过NCBI BLAST分析后发现,其与Genebank中公布的编码人Ⅱ型胶原蛋白的基因序列（NM₀01844）同源性达99%。结论成功克隆出了hCⅡcDNA基因。