抗β淀粉样肽40人单克隆抗体在昆虫细胞分泌表达

目的通过杆状病毒昆虫细胞系统重组表达抗β淀粉样肽40人单克隆抗体,为全人抗体治疗阿尔茨海默病创造条件。方法将抗β淀粉样肽40人单链抗体重链可变区和轻链可变区分别克隆插入pAC-L-CH3的多克隆位点,构建成pAC-VH-VL表达质粒。将表达质粒和BaculoGold共转染SF9细胞后,用免疫荧光方法进行人IgG表达的检测。将感染重组杆状病毒的昆虫细胞培养液上清过蛋白A-琼脂糖亲和层析柱,洗脱纯化出的抗体经过SDS-PAGE电泳鉴定纯化蛋白质。结果杆状病毒昆虫细胞系统抗β淀粉样肽40人单克隆抗体表达质粒pAC-VH-VL构建成功。将表达质粒和辅助病毒感染昆虫细胞后可见昆虫细胞表达人抗体。经过蛋白A-琼脂糖亲和层析,从昆虫细胞培养基中纯化出抗β淀粉样肽40人单克隆抗体。结论通过基因工程手段在人抗Aβ40抗体可变区羧基端连接人抗体恒定区片段,通过杆状病毒昆虫系统分泌表达并纯化获得完整的人抗Aβ40单克隆抗体。