| 杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 张磊,崔柳青,李杰,刘红涛,薛乐勋.杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备[J].郑州大学学报(医学版),2010,0(6). |
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| 作者姓名： | 张磊 崔柳青 李杰 刘红涛 薛乐勋 |
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| 作者单位： | 郑州大学生物工程系细胞生物学研究室,郑州,450001 |
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| 基金项目： | 科技部国际科技合作基金,国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的：纯化杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）重组蛋白,制备多克隆抗体。方法：PCR扩增得到两端分别添加NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的GPI基因,双酶切后插入原核表达载体pET28a（＋）,得到重组载体pET28a-GPI,经鉴定正确后,用该重组载体转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达后用镍离子柱纯化目的蛋白并免疫新西兰白兔,间接ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性。结果：杜氏盐藻GPI基因在大肠杆菌BL21（DE3）中得到高效表达,占总蛋白的41.6%。以高纯度的目标蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,得到抗GPI的抗血清。间接ELISA检测抗血清效价达到1：512000,Westernblot检测证实抗血清能与目的蛋白特异性结合。结论：成功纯化了杜氏盐藻GPI重组蛋白并制备了特异性的GPI多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 葡萄糖-6-磷酸异构酶 原核表达 抗体制备 杜氏盐藻 |
Purification of Dunaliella salina glucose-6-phosphate isomerase recombinant proteins in engineering bacteria and preparation of their polyclonal antibody |
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| ZHANG Lei
,
CUI Liuqing
,
LI Jie
,
LIU Hongtao
,
XUE Lexun.Purification of Dunaliella salina glucose-6-phosphate isomerase recombinant proteins in engineering bacteria and preparation of their polyclonal antibody[J].Journal of Zhengzhou University: Med Sci,2010,0(6). |
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| Authors: | ZHANG Lei CUI Liuqing LI Jie LIU Hongtao XUE Lexun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | glucose-6-phosphate isomerase prokaryotic expression preparation of polyclonal antibody Dunaliella salina |
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