乌梅丸对溃疡性结肠炎模型小鼠炎症因子及肠道菌群的影响

目的：研究乌梅丸对葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium, DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)模型小鼠炎症因子和肠道菌群的调控作用。方法：C57BL/6J小鼠40只,随机分为空白组、模型组、美沙拉秦组、乌梅丸低剂量组、乌梅丸高剂量组,每组8只。自由饮用2% DSS复制UC小鼠模型,造模同时治疗组每天灌胃给药,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,持续7 d。期间观察记录小鼠状态、体重、便血情况和粪便性状,计算疾病活动指数(Disease Activity Index, DAI)评分。实验结束后,取血液、处死小鼠,摘取完整结肠,收集粪便,观察结肠黏膜损伤情况,苏木素-伊红(H&E)染色观察结肠病理损伤和肝、肾损伤;阿利新蓝-过碘酸-雪夫(Alcian blue-periodic acid-Schiff, AB-Pas)染色观察结肠杯状细胞;ELISA法检测血清白细胞介素-6(Iinterleukin-6, IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测结肠IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-P65、P65蛋白表达,16S rDNA高通量测序检测小鼠肠道菌群变化。结果：与空白组相比,模型组小鼠便血,体重下降,结肠缩短,结肠表面明显损伤,结肠组织炎性细胞浸润且杯状细胞流失,结肠黏膜损伤指数（Colon mucosa damage index,CMDI）、病理组织学评分（Histological score, HS）升高,IL-6、TNF-α水平升高,IL-10水平降低,P65蛋白磷酸化水平升高,小鼠肠道菌群丰度降低,菌群构成改变。与模型组相比,两个剂量乌梅丸均能延缓小鼠体重下降,缓解便血症状,降低DAI评分,抑制小鼠结肠缩短,缓解结肠表面损伤,减少杯状细胞流失(P < 0.05, P < 0.01),降低CMDI、HS评分,降低血清和结肠组织IL-6、TNF-α水平,抑制结肠P65磷酸化;乌梅丸高剂量(Wumei Wan, high-dose, WMW H)组小鼠血清和结肠组织IL-10表达升高,各组小鼠均未出现肝肾损伤。在门水平上,厚壁菌门丰度减少,变形菌门、拟杆菌门和放线菌门丰度增加。在属水平上,梭状芽孢杆菌丰度减少,Muribaculacea丰度增加。结论：乌梅丸能减轻DSS诱导的UC模型小鼠结肠炎症,其作用机制可能与调节炎症因子和调控肠道菌群有关。