PEG化甲氧基雌二醇纳米粒减轻糖氧剥夺/再灌注后脑血管内皮屏障损伤

目的 探究PEG化甲氧基雌二醇(polyethylene glycol-2-methoxyestradiol, PEG-2ME₂/2ME₂)纳米粒对糖氧剥夺/再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion, OGD/R)后脑血管内皮细胞RBE4的影响。方法 通过溶剂挥发法构建PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒,通过透射电镜(transmission electron microscope, TEM)和激光粒度分析仪检测纳米粒表征;通过CCK-8法检测PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒对RBE4的细胞毒性;使用OGD/R体外模拟缺血再灌注,通过CCK-8法检测细胞活性,采用Western blot法和免疫荧光法对紧密连接蛋白的表达情况进行检测,以及通过建立体外血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)模型和检测荧光探针渗漏情况综合评估脑血管内皮细胞的屏障功能;利用活性氧(reactive oxygen species, ROS)探针检测RBE4细胞内ROS水平;采用Western blot法检测过氧化物歧化酶判断RBE4细胞内氧化还原情况。结果 透射电镜结果显示,PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒球形形态稳定;激光粒度分析仪结果显示,PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒大小均一;CCK-8法检测结果显示,PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒中2ME₂浓度小于5μmol/L对RBE4细胞无明显的细胞毒性;CCK-8法检测结果显示,PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒较2ME₂单药能显著挽救OGD/R后RBE4细胞的细胞活性,能遏止紧密连接蛋白表达下调,能有效恢复脑血管内皮细胞的屏障功能;ROS探针检测和Western blot法检测结果显示,PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒较2ME₂单药能明显降低细胞内ROS水平,恢复超氧化物歧化酶的表达。结论 PEG-2ME₂/2ME₂纳米粒大小、形态均一稳定,对RBE4细胞起到保护作用,有效恢复血脑屏障的完整性和屏障功能,有望成为OGD/R后脑血管内皮屏障损伤治疗的潜在药物。