超声联合脂氟显微泡转染HepG2细胞的参数优化

目的 探索治疗性超声联合脂氟显微泡对人肝癌细胞HepG2基因转染的可行性及其实现高效率转染的优化参数.方法 HepG2细胞交叉间隔接种于24孔板,用治疗性超声辐照含脂氟显微泡和EGFP质粒的各组细胞.分组:超声强度梯度组(A组),A1～A5亚组,分别为0.4 W/cm2、0.8 W/cm2、1.2 W/cm2、1.6 W/cm2和2.0 W/cm2；占空比梯度组(B组),B1～B3亚组,分别为10％、20％和50％；时间组(C组),C1～C3亚组,分别为30 s、90s、180 s.24 h后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,流式细胞仪检测基因转染率,台盼蓝染色检测细胞死亡率.结果 不同超声强度、占空比和时间下,质粒转染效率各不相同.在一定范围内,分别增加超声强度、占空比和时间均可以提高转染效率.对于超声强度和占空比,当设置过高(声强＞1.6 W/cm2或占空比＞50％)时,由于细胞死亡率增加导致实际转染效率下降.超声强度为1.2 W/cm2时,转染率和死亡率优于A组其余各亚组；占空比为20％时,转染率和死亡率优于B组其余各亚组.当超过90s后继续增加时间,对于转染率和细胞死亡率的影响无明显统计学意义(P＞0.05).结论 超声辐照微泡是一种介导基因体外转染的有效方法,不同参数下转染率差别较大,优化参数有利于促进基因转染.

Parameters optimization of ultrasound mediated gene transfection in HepG2