| CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响 |
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| 引用本文： | 徐新云,毛侃琅,毛吉炎,吴德生,秦逍云,杨细飞,张然,周丽,黄新凤.CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响[J].中国职业医学,2013,40(4). |
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| 作者姓名： | 徐新云 毛侃琅 毛吉炎 吴德生 秦逍云 杨细飞 张然 周丽 黄新凤 |
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| 作者单位： | 1. 深圳市疾病预防控制中心卫生毒理学重点实验室,深圳市现代毒理学重点实验室,广东深圳518055
2. 深圳市疾病预防控制中心卫生毒理学重点实验室,深圳市现代毒理学重点实验室,广东深圳518055;深圳大学生命科学学院,518060 |
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| 基金项目： | 深圳市科技计划重点项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1 A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定.分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmoL/L染毒剂量组),观察凋亡基因B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA 序列一致.CYP1A2沉默细胞的CYP1A2mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9％和82.4％(P＜0.01).TCE染毒后,0.25 ～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P＜0.01);部分0.25 ～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用.
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| 关 键 词： | 肝细胞 细胞色素氧化酶1A2 细胞色素1A2基因沉默细胞 三氯乙烯 凋亡基因 癌基因 |
Construction of CYP1A2-silence hepatocytes and the effects of CYP1A2-silence on trichloroethylene toxicity |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatocyte CYP1A2 CYP1A2-silenced hepatocyte Trichloroethylene Apoptosis gene Oncogene |
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