PRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体及包装细胞株的构建

目的 用PRS逆转录病毒载体构建介导人结缔组织生长因子（CTGF）小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）表达的PRS—CTGF—SiR．NA逆转录病毒载体，并建立高效、稳定表达CTGF—SiRNA的包装细胞株。方法 根据siRNA靶序列设计要求及PRS逆转录病毒载体特点分别设计含64bp DNA序列的4对寡核苷酸，并在体外合成。PRS载体用Bg1Ⅱ、HindⅢ双酶切完全后，分别与退火的4对寡核苷酸进行连接，构建成表达CTGF小分子干扰RNA的PRS—CTGF—SiRNA逆转录病毒载体。用脂质体2000介导转染PT67包装细胞，经抗性筛选，挑单克隆，扩大培养，用NIH3T3细胞测定病毒滴度，筛选出高效产毒细胞株。结果经酶切、连接后构建成的质粒称之为PRS—CTG—siRNA1—4，经酶切与测序证实构建成功，无任何碱基突变。经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和NⅠH3T3测定病毒滴度，筛选出具有高病毒滴度的细胞集落，扩大培养后建立CTGF—SiRNA高效表达的包装细胞株。结论 成功构建了能表达CTGFsiRNA的PRS—CTGF—SiRNA逆转录病毒载体，并建立了稳定、高效生产有活性的的CTGF-SiRNA产毒包装细胞株。

Construction of retrovirus expressing CTGF siRNA and its steady packaging cell line mediated by PRS retrovirus vector