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| 小鼠分泌型内皮抑素原核表达载体pNZ44-ssEndostatin的构建及表达 | |
| 引用本文： | 刘林林,孙宝胜,李艳博,郭彩霞,龚守良,邵国光,许传杰.小鼠分泌型内皮抑素原核表达载体pNZ44-ssEndostatin的构建及表达[J].中国肿瘤临床,2008,35(8):459-462. |
| 作者姓名： | 刘林林 孙宝胜 李艳博 郭彩霞 龚守良 邵国光 许传杰 |
| 作者单位： | 1. 吉林大学第二医院放疗科,长春市,130021 2. 吉林省肿瘤医院 3. 吉林大学第二医院胸外科 4. 吉林大学公共卫生学院 |
| 摘 要： | 目的：构建带有小鼠分泌型内皮抑素（ssEndostatin）的原核表达载体pNZ44-ssEndostatin并在双歧杆菌中表达Endostatin蛋白方法：利用引物设计软件oligo6．0设计引物，从pcDNA3.1-Egr1-ssEndostatin质粒上PCR扩增得到ssEndostatin基因。经测序证实获得的ssEndostatin基因序列正确后，进行粘端连接，将ssEndostatin基因链接到pNZ44原核表达载体上，构建成pNZ44-ssEndostatin重组载体，PCR、酶切鉴定正确后电转化到双歧杆菌中然后利用ELISA法检测Endostatin表达。结果：测序结果证实ssEndostatin基因序列与Genebank中所公布的一致，说明ssEndostatin基因扩增正确而且构建的质粒pNZ44-ssEndostatin的PCR、酶切鉴定结果与预测的一致，说明重组质粒pNZ44-ssEndostatin构建成功转化后挑取阳性克隆进行菌落PCR证实重组质粒pNZ44-ssEndostatin已戍功转入双歧杆菌中ELISA法检测到转化有重组质粒pNZ44-ssEndostatin的双歧杆菌的菌体内有较高水平的Endostatin表达，且培养48h的表达量较20h的高，有氧条件下表达较缺氧条件下高，但上清中未捡测到。结论：成功地构建了带有分泌信号的小鼠内皮抑素表达载体pNZ44－ssEndostalin，成功转入双歧杆菌中并在菌体中表达，为后续利用双歧杆菌作为工具进行Endostatin基因治疗奠定了实验基础。 |
| 关 键 词： | 内皮抑素 原核表达栽体 分泌型 双歧杆菌 小鼠 分泌型 内皮抑素 原核表达载体 构建及表达 Endostatin Mouse Form Expression Vector Prokaryotic 实验基础 基因治疗 后续利用 信号 上清 缺氧条件 有氧 表达量 培养 水平 |
| 修稿时间： | 2007年10月31 |
Construction and Expression of Prokaryotic Expression Vector pNZ44-ssEndostatin with Secretable Form of Mouse Endostatin |
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| LIU Linlin,SUN Baosheng,LI Yanbo,GUO Caixia,GONG Shouliang,SHAO Guoguang,XU Chuanjie.Construction and Expression of Prokaryotic Expression Vector pNZ44-ssEndostatin with Secretable Form of Mouse Endostatin[J].Chinese Journal of Clinical Oncology,2008,35(8):459-462. | |
| Authors: | LIU Linlin SUN Baosheng LI Yanbo GUO Caixia GONG Shouliang SHAO Guoguang XU Chuanjie |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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