脱细胞胆管细胞外基质替代胆总管缺损的研究

目的 探讨脱细胞胆管细胞外基质（ECM）的制备方法及其替代胆总管缺损的可行性。方法 采用4因素3水平9次实验的正交设计L9（3^4）]，切取活体犬的肝外胆管39段，每段长1cm，其中27段按正交设计随机分为9组行脱细胞处理，试验重复3次。采用苏木素．伊红（HE）染色及计算机图像分析对ECM进行残余细胞成分计数，进行极差分析及方差分析，获得制备ECM的最佳方案。另12段胆管按最佳方案制备成ECM并用于同种异体胆总管缺损修复实验。分别于术后2、4、12及24周取材观察缺损修复处组织再生情况。结果脱细胞后第7、9组未发现残余细胞，ECM富含胶原，第9组胶原呈立体交叉交联。移植术后2周，ECM内膜面见少量单层上皮细胞，有血管长入其中，ECM中有少量成纤维和平滑肌细胞，吻合口处有较多炎性细胞浸润；4周ECM管腔被上皮细胞覆盖，排列整齐，ECM中有较多成纤维和少量平滑肌细胞，吻合口有少量炎性细胞浸润；12周吻合痕迹消失，ECM中有较多成纤维、平滑肌细胞和少量纤维细胞；24周ECM中有以平滑肌细胞和纤维细胞为主，少量成纤维细胞，结构近似正常。结论制备ECM中3个关键条件的最佳水平为A383C3，即在胆管脱细胞处理过程中采用0．4％胰蛋白酶、1．0％叠氮二苯基磷（DPPA）、40U／ml DNA酶。所得ECM应用于犬同种异体胆总管端端吻合修补，效果满意。

Bile duct extracellular matrix transplantation into bile duct defects: an experimental study