| rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究 |
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| 引用本文： | 朱诗应,何胜菲,王文博,赵平,任浩,戚中田. rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究[J]. 热带医学杂志, 2012, 12(10): 1171-1174 |
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| 作者姓名： | 朱诗应 何胜菲 王文博 赵平 任浩 戚中田 |
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| 作者单位： | 第二军医大学微生物学教研室,上海市医学生物防护重点实验室,上海200433 |
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| 基金项目： | 全军十二五科技重大项目(AWS11C001);第二军医大学军事医学专项(2010JS02);上海市重点学科建设项目(B901) |
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| 摘 要： | 目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序。结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bpDNA片段,而各种对照菌株均未见扩增。序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88%。以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32×101±7.45×100)拷贝。结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群快速而准确的检测。
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| 关 键 词： | 蜡样芽胞杆菌群 rpoB基因 实时定量PCR |
Using real-time quantitative PCR for the detection of rpoB gene of Bacillus cereus group |
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| ZHU Shi-ying, HE Sheng-fei, WANG Wen-bo, ZHAO Ping, REN Hao, QI Zhong-tian. Using real-time quantitative PCR for the detection of rpoB gene of Bacillus cereus group[J]. Journal Of Tropical Medicine, 2012, 12(10): 1171-1174 |
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| Authors: | ZHU Shi-ying HE Sheng-fei WANG Wen-bo ZHAO Ping REN Hao QI Zhong-tian |
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| Affiliation: | (Department of Microbiology, Shanghai Key Laboratory of Medical Biodefense, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China) |
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