| ULBP4原核表达、生物学功能鉴定及其单克隆抗体的制备和初步鉴定 |
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| 引用本文： | 曹伟,郝志勇,郗雪艳,孔燕,马驰,崔莲仙,何维. ULBP4原核表达、生物学功能鉴定及其单克隆抗体的制备和初步鉴定[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2007, 23(3): 242-245 |
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| 作者姓名： | 曹伟 郝志勇 郗雪艳 孔燕 马驰 崔莲仙 何维 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院基础医学研究所,中国协和医科大学基础医学院免疫系,北京,100005 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划);国家自然科学基金;国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | ![]()
目的:在大肠杆菌中表达ULBP4重组蛋白,并制备其特异性的单克隆抗体(mAb),为γδT细胞对ULBP4的识别机制研究奠定基础。方法:根据GenBank中ULBP4的基因序列设计相应的引物,用RT-PCR方法从HO-8910细胞中扩增得到ULBP4片段,构建重组原核表达质粒pET22b( )/ULBP4(前225aa胞外段),在Rosetta-gamiTMB(DE3)大肠杆菌中获得表达且主要位于包含体中,经纯化透析复性后,分析其对NK细胞IFN-γ细胞因子分泌的影响。以ULBP4为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化培养、荧光免疫检测和流式细胞术以及Western blot筛选和鉴定抗ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株。结果:构建了pET22b( )/ULBP4(225aa)原核表达体系,并检测到重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白在体外培养体系中可以刺激NK细胞IFN-γ细胞因子的分泌。此外,还获得了4株可稳定分泌抗人ULBP4 mAb的杂交瘤细胞株。结论:成功地构建并表达了具有生物活性的ULBP4,为γδT细胞的识别机制研究建立抗原制备平台,同时所制备的抗人ULBP4 mAb,为后续研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | IFN-γ Rosetta-gamiTMB(DE3)大肠杆菌 表达 生物学功能 单克隆抗体 |
| 文章编号： | 1007-8738（2007）03-0242-04 |
| 修稿时间： | 2006-11-20 |
Expression and biological function of ULBP4 in Rosetta-gamiTMB(DE3) and mAb preparation |
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| CAO We,HAO Zhi-yong,XI Xue-yan,KONG Yan,MA Chi,CUI Lian-xian,HE We. Expression and biological function of ULBP4 in Rosetta-gamiTMB(DE3) and mAb preparation[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2007, 23(3): 242-245 |
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| Authors: | CAO We HAO Zhi-yong XI Xue-yan KONG Yan MA Chi CUI Lian-xian HE We |
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| Affiliation: | Department of Immunology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences and School of Basic Medicine, Peking Union Medical College, Beijing, China. caowei_111@yahoo.com.cn |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | ULBP4 NKG2D |
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