半胱天冬氨酸蛋白酶-12小干扰RNA对小鼠肝细胞凋亡的阻抑

目的观察小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12（caspase-12）基因特异性小干扰RNA（siRNA）构建的表达载体pRNAT-casp12对caspase-12基因的抑制及其对内质网应激介导的小鼠肝细胞凋亡的影响。方法以小鼠肝细胞株Hepa1-6为靶细胞，利用脂质体与重组质粒pRNAT-casp-2共转染，分别在转染24、48和72h后收集细胞，采用实时荧光定量PCR分析和Western印迹检测caspase-12的表达；利用毒胡萝b素（TG）诱导细胞，建立内质网应激介导的细胞凋亡模型，通过DNA梯带凝胶电泳检测，选出适合的诱导时间；TG诱导已转染了pRNAT—casp12的干扰组细胞后，以空质粒转染组为对照，利用Western印迹检测caspase-12蛋白表达水平的变化，通过DNA梯带凝胶电泳、流式细胞仪、Hoechst33258染色等方法检测细胞凋亡，观察caspase-12siRNA对细胞凋亡的影响。结果pRNAT—casp12转染细胞24、48和72h后，caspase-12mRNA的水平分别下降了45．6％、72．5％和59．5％；caspase-12蛋白表达下降了17．1％、37．3％和60．1％；2μmol／L TG处理细胞30h后，成功诱导细胞凋亡；与对照组相比，干扰组细胞经TG诱导后，caspase-12蛋白表达水平下降了54．6％，流式细胞仪检测发现早期调亡率下调了51．4％（P〈0．01）。结论小鼠caspase-12siRNA对Hepa1—6细胞caspase-12基因的表达具有显著的抑制作用，能够明显阻抑内质网应激介导的凋亡，有望发展成为新一代抗凋亡药物。

Inhibition of apoptosis by small interfering RNA against caspase-12 in mouse hepatoma cell line