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| 敲低和敲除OPTN基因SKOV3细胞的构建及其对抗癌药物敏感性的影响 | |
| 作者姓名： | 王鹏 陈曦 徐恰 刘会 郭若文 刘芸 许尹 秦宜德 |
| 作者单位： | 1. 安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;2. 安徽医科大学基础医学院免疫学教研室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(编号:81472448、81601107)； |
| 摘 要： | 目的利用RNA干扰技术建立稳定敲低OPTN蛋白的人SKOV3细胞株和利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立稳定敲除OPTN蛋白的人SKOV3细胞株,并研究降低OPTN基因表达对细胞抗癌药物敏感性的影响。方法针对OPTN基因设计shRNA和sgRNA的序列,并与慢病毒载体质粒pGPU 6GFPNeo和敲除质粒PX 459载体连接产生重组载体。并将重组的质粒测序验证,将测序成功的重组质粒载体与包装质粒(psPAX 2、pMD 2.G)共转染293 T细胞进行病毒包装,收集病毒上清液并感染SKOV3细胞,获得稳定敲低和稳定敲除OPTN基因的SKOV3细胞株。RT-PCR检测敲低组OPTN基因的表达的变化,PCR检测敲除组的基因组DNA的变化,Western blot法分析检测OPTN蛋白的表达情况。MTT法检测DDP对卵巢癌细胞增殖的影响,qRT-PCR检测caspase3、Bax、Bcl-2的mRNA的表达情况,Western blot检测caspase3、Bax、和Bcl-2蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒载体和基因敲除载体,在SKOV... |
| 关 键 词： | 卵巢癌 OPTN 基因敲减 基因敲除 细胞耐药性 |