健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化

目的探讨健脾化瘀方（JHD）通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 利用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激MHCC97H 细胞，构建肝癌细胞EMT 模型。根据处理条件，将细胞分为 4 组，①对照组：不进行干预；②模型组：TGF-β1（10 ng·mL-1）；③JHD 低浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健 脾化瘀方（2 mg·mL-1）；④JHD 高浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健脾化瘀方（4 mg·mL-1）。干预48 h 后，采用 超速离心法提取各组细胞培养上清液的外泌体，通过透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）、Western Blot 法检测外泌体标志蛋白（CD63、CD81、HsP70、CD9），以及外泌体内吞实验对外泌体进行鉴定。将提取的 4 组外泌体分别与MHCC97H 细胞共培养24 h/48 h 后，分离MHCC97H 细胞，进行划细胞划痕实验、Transwell 细胞侵袭实验及Western Blot 法检测EMT 相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）。结果透射电镜下观 察到外泌体的形态呈囊泡状，分布不一，有单个分布，也有聚集成组，背景清晰，无明显污染物，各组外泌体 形态相近，无明显差异，直径在30~140 nm 之间；纳米颗粒追踪分析仪检测到4 组外泌体粒径的峰值在130~ 150 nm 之间，与电镜观察结果基本一致；各组均可检测到外泌体标志蛋白CD63、CD81、HsP70、CD9 表达。 被PKH26 标记的外泌体可被MHCC97H 细胞重新吸收内化。与对照组比较，模型组的MHCC97H 细胞迁移能 力（24、48 h）及侵袭能力均显著增强（P＜0.01）， E-cadherin 蛋白表达显著下调（P＜0.01）， Vimentin、 N-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01）。与模型组比较，JHD 高、低浓度组的MHCC97H 细胞迁移能力（24、 48 h）及侵袭能力显著减弱（P＜0.01），E-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01），Vimentin、N-cadherin 蛋白表 达显著下调（P＜0.01）。结论健脾化瘀方体外可通过外泌体抑制MHCC97H 细胞的迁移、侵袭及上皮间质 转化。