| 刚地弓形虫HSP70真核表达质粒构建及评价 |
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| 引用本文： | 殷丽天, 刘阳, 孟晓丽, 王海龙, 刘红丽, 殷国荣. 刚地弓形虫HSP70真核表达质粒构建及评价[J]. 中国公共卫生, 2012, 28(9): 1191-1193. DOI: 10.11847/zgggws2012-28-09-18 |
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| 作者姓名： | 殷丽天 刘阳 孟晓丽 王海龙 刘红丽 殷国荣 |
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| 作者单位： | 1.山西医科大学生理学系 细胞生理学省部共建教育部重点实验室, 山西 太原 030001;;2.山西医科大学寄生虫学教研室 |
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| 摘 要： | 目的 构建刚地弓形虫热休克蛋白70(TgHSP70)真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK 293T细胞内获得表达,为制备基因疫苗奠定基础。方法 扩增TgHSP70基因,双酶切后与真核表达质粒p3×Flag-CMW-14连接,经酶切、PCR及测序鉴定;脂质体法将重组体转染HEK 293T细胞中,TgHSP70的表达产物通过RT-PCR和western blot在基因和蛋白2个水平鉴定。结果 PCR扩增获得约495 bp的HSP70基因片段,p3×Flag-CMW-14-TgHSP70重组质粒构建成功,经双酶切、PCR及测序鉴定,重组质粒基因序列完全正确;将p3×Flag-CMW-14-TgHSP70转染到HEK 293T细胞中,经RT-PCR检测获得预期大小目的基因条带,Western-blot检测表达产物大小约19 kDa。结论 成功构建了真核表达重组质粒p3×Flag-CMW-14-TgHSP70,并在HEK 293T正确表达。
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| 关 键 词： | 刚地弓形虫 热休克蛋白70(HSP70) 基因重组 真核表达 |
| 收稿时间： | 2011-07-10 |
Construction, identification and expression of eukaryotic recombinant expression plasmid containing Toxoplasma gondii HSP70 |
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| YIN Li-tian, LIU Yang, MENG Xiao-li, . Construction, identification and expression of eukaryotic recombinant expression plasmid containing Toxoplasma gondii HSP70[J]. Chinese Journal of Public Health, 2012, 28(9): 1191-1193. DOI: 10.11847/zgggws2012-28-09-18 |
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| Authors: | YIN Li-tian LIU Yang MENG Xiao-li |
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| Affiliation: | 1.Department of Physiology, Key Laboratory of Cellular Physiology Co-constructed by Province and Ministry of Education, Shanxi Medical University, Taiyuan, Shanxi Province 030001, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Toxoplasma gondii heat shock protein 70(HSP70) gene recombinant eukaryotic expression |
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