| 小鼠脊髓微血管周细胞的体外培养及鉴定 |
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| 引用本文： | 苑晓晨,武清斌,李宏伟,荆瀛黎,李炳蔚,刘淑英,修瑞娟.小鼠脊髓微血管周细胞的体外培养及鉴定[J].基础医学与临床,2015,35(5). |
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| 作者姓名： | 苑晓晨 武清斌 李宏伟 荆瀛黎 李炳蔚 刘淑英 修瑞娟 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院北京协和医学院微循环研究所,北京,100005 |
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| 基金项目： | 2014年协和青年教师基金&中央高校基本科研业务费专项资金 |
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| 摘 要： | 目的应用周细胞培养基(PCM)分离筛选小鼠脊髓微血管周细胞(SCMP),对其生物学功能进行评价。方法10只3周龄C57小鼠,无菌条件下取脊髓去除软脊膜,剪碎成大约1 mm×1 mm×1 mm。两次酶消化后用含20%牛血清白蛋白的DMEM离心获得微血管。用内皮细胞培养基(ECM)培养,传代2次后改用PCM培养。倒置显微镜观察细胞增殖状况。免疫细胞化学法检测血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)、神经元-胶质抗原2(NG2)、von Willebrand因子(v WF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。流式检测CD140b、CD31、CD11b和GFAP的表达。将PCM换为10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基,检测细胞α-SMA表达的变化。通过周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测细胞成管能力。结果接种48 h细胞爬出,7~9 d汇合,周细胞和内皮细胞伴随状增殖。改用PCM培养后内皮细胞减少,周细胞呈优势生长。免疫细胞化学表明PDGFRβ和NG2阳性,v WF和GFAP阴性;流式结果表明细胞PDGFRβ的阳性率为95.52%±2.55%,GFAP为0.63%±0.26%,CD31为0.80%±0.26%,CD11b为1.02%±0.35%。10%胎牛血清的DMEM促进细胞分化,α-SMA表达升高。成管实验周细胞与内皮细胞共同形成管腔样结构。结论通过PCM筛选法能够成功获得纯度较高的SCMP,所获得的细胞具备明显的周细胞的形态和功能特征。
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| 关 键 词： | 周细胞 脊髓 微血管 细胞分离 |
Isolation and identification of mouse spinal cord microvessel pericytes in vitro |
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| YUAN Xiao-chen,WU Qing-bin,LI Hong-wei,JING Ying-li,LI Bing-wei,LIU Shu-ying,XIU Rui-juan.Isolation and identification of mouse spinal cord microvessel pericytes in vitro[J].Basic Medical Sciences and Clinics,2015,35(5). |
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| Authors: | YUAN Xiao-chen WU Qing-bin LI Hong-wei JING Ying-li LI Bing-wei LIU Shu-ying XIU Rui-juan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pericytes spinal cord microvessel cell isolation |
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