| 重组人骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化 |
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| 引用本文： | 孙传秀,赵文志,何盛为,方旭,米立东,杜广宇,张路. 重组人骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2009, 13(7): 1267-1270 |
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| 作者姓名： | 孙传秀 赵文志 何盛为 方旭 米立东 杜广宇 张路 |
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| 作者单位： | 大连医科大学附属第二医院,北院骨外科,辽宁省大连市116031 |
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| 摘 要： | 背景:骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白2诱骨活性最强,在骨组织工程研究中需要大量的骨形态发生蛋白2.目的:克隆表达骨形态发生蛋白2基因,并进行蛋白表达及蛋白纯化定量.设计、时间及地点:单一样奉观察,于2008-05/07在宝牛物工程(大连)有限公司开放实验室完成.材料:表达载体pET28a Vector及相应的宿主细胞E.coil BL21(DE3)购于Novagen公司;分子伴侣质粒pTF16、pGr07、PKJE7购于宝生物工程(大连)有限公司.方法:利用基因重组技术,优化片人工合成骨形态发生蛋白2基因,亚克隆至含T7启动子的原核表达载体pET28a中,构建表达载体pET-BMP.将重组质粒pET-BMP与3种含分子伴侣质粒共转入宿主菌E.coil BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达.菌体经超声波破碎,镍柱亲和层析纯化并定量.主要观察指标:①3种表达质粒的表达及町溶性检测及表达上清的westem blotting检测.②pET-BMPg的纯化.结果:在表达宿主菌中,骨形态发生蛋白 2基因获得了高效表达,其中一组为可溶性表达,表达产物经亲和层析纯化后,可溶性表达量达12.18 mg/L培养基.结论:人骨形态发生蛋白2基凼能在PET表达系统中得到高效可溶性表达.
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| 关 键 词： | 骨形态发生蛋白2 基因表达 组织构建 |
Soluble expression and purification of recombinant human bone morphogenetic protein-2 gene in E. coli |
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| Sun Chuan-xiu,Zhao Wen-zhi,He Sheng-wei,Fang Xu,Mi Li-dong,Du Guang-yu,Zhang Lu. Soluble expression and purification of recombinant human bone morphogenetic protein-2 gene in E. coli[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2009, 13(7): 1267-1270 |
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| Authors: | Sun Chuan-xiu Zhao Wen-zhi He Sheng-wei Fang Xu Mi Li-dong Du Guang-yu Zhang Lu |
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