靶向人ERG基因的siRNA重组慢病毒表达载体的构建

目的构建靶向人ERG基因的siRNA重组慢病毒表达载体。方法针对人ERG基因的mRAN序列,设计特异性干扰序列,两端引入酶切位点,人工合成OligoDNA,退火后与双酶切的pLVX-shRNA2慢病毒载体质粒连接,构建慢病毒载体质粒pLVX-shRNA2-ERGsiRNA,通过测序鉴定连接正确后,以293T细胞包装得到荷载ERGsiRNA基因的慢病毒;根据293T细胞表达绿色荧光蛋白水平计算病毒滴度;病毒感染前列腺癌VCaP细胞株,通过实时荧光定量PCR检测ERGmRNA的表达。结果测序结果表明,靶向人ERG基因的siRNA慢病毒表达载体构建成功,包装后的慢病毒滴度为1.1×108TU/ml。感染VCaP细胞后,实验组和对照组相比ERGmRNA的表达水平显著降低,siRNA对ERG表达的干扰效率为87.46%。结论成功构建靶向人ERG基因的siRNA慢病毒表达载体。