| 重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究 |
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| 引用本文： | 杨亚男,鲁勇,刘景晶,曹荣月. 重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究[J]. 西北药学杂志, 2010, 25(3): 206-208. DOI: 10.3969/j.issn.1004-2407.2010.03.024 |
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| 作者姓名： | 杨亚男 鲁勇 刘景晶 曹荣月 |
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| 作者单位： | 中国药科大学生命科学与技术学院微基因药学实验室,江苏,南京,210009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省自然科学基金 |
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| 摘 要： | ![]()
目的对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-I HI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法对包涵体蛋白纯化复性的工艺。方法工程菌pET28a-I HI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干燥,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验。结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg。结论该工艺耗时短,效果好,成本较低。
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| 关 键 词： | 基因工程 重组人胰岛素 纯化 磺酸化 |
Study on the downstream process on recombinant human insulin pET28a-IHI |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | |
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