| 靶向CD19的CAR修饰的NK细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤 |
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| 作者姓名： | 袁园 秦扬 游凤涛 陈丹 邹建炫 朱学军 李炳宗 袁磊 孟会敏 张波桢 安钢力 杨林 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学唐仲英血液学研究中心,江苏苏州,215123;2. 云南省肿瘤医院泌尿科,云南昆明,650118;3. 博生吉医药科技(苏州)有限公司,江苏苏州,215123;4. 江苏省中医院血液科,江苏南京,210029;5. 苏州大学附属第二医院血液科,江苏苏州,215004;6. 中国人民解放军总医院血液科,北京,100853 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（No.31471283） |
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| 摘 要： | 目的:利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR(pCD19-CAR)修饰的NK细胞对CD19+B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用.方法:用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序法获得抗体的序列.分析抗体序列,并通过基因合成和分子克隆技术构建pCD19-CAR片段,然后将其克隆到慢病毒载体上,病毒包装制备后,转染NK-92MI细胞.最后,用流式细胞术检测不同的pCD9-CAR-NK-92MI细胞对CD19+细胞的杀伤率.结果:(1)成功筛出特异性强的CD19单克隆抗体-pCD19;(2)抗体检测结果显示CD19+的Ramos细胞的阳性率为84.3％,Raji为85.6％,与商业化抗体结果相似;(3)被pCD19-CAR修饰的CD19-CAR阳性率为28.72％的NK-92MI细胞对CD19+的Ramos和Raji细胞的杀伤效率明显高于未被修饰的NK-92MI细胞株对Ramos和Raji细胞的杀伤率[(47.1±1.7)％vs(24.7±6.2)％和(51.8±7.9)％vs(27.6±9.6)％,均P＜0.05];对CD19-细胞Jurkat,不论是未被pCD19-CAR修饰的NK-92MI或是被修饰的NK-92MI细胞,几乎都不存在特异性杀伤作用[(16.1±0.7)％vs(17.7±2.9)％,P＞0.05].结论:成功构建pCD19-CAR,被pCD19-CAR修饰的NK-92MI细胞能特异性的识别CD19抗原并杀伤CD19+B细胞淋巴瘤细胞.
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| 关 键 词： | 单克隆抗体 嵌合抗原受体 NK-92MI细胞 CD19 B细胞淋巴瘤 |
| 收稿时间： | 2016-04-15 |
| 修稿时间： | 2016-08-30 |
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