包裹pHEV23纳米壳聚糖的制备和特性

背景：裸DNA在基因治疗中易被体内核酸酶降解。携载DNA疫苗的病毒类载体存在致癌和引发免疫应答等安全问题，且制备方法复杂。非病毒载体（尤其是阳离子-DNA聚合物）具有低毒，低免疫反应，能重复给药，易于大量制备等优点。壳聚糖是一种天然阳离子碱性聚多糖，具有良好的生物可降解性、生物相容性及生物安全性。目的：制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖，观察其表征及对DNA的保护作用。设计、时间及地点：对比观察实验，于2007-06／2008-05在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料：壳聚糖，脱乙酰度88％，批号061220，由青岛利中甲壳质公司提供。质粒pHEV23为浙江省医学科学院生物工程研究所实验室提供。方法：通过脱水剂Na2SO4诱导的复凝聚沉淀法制备含质粒pHEV23的纳米壳聚糖。根据壳聚糖质量浓度1．4，0．7，0．4g／L，分别制备壳聚糖（高）-pHEV23、壳聚糖（中）-pHEV23、壳聚糖（低）-pHEV23。主要观察指标：激光纳米粒度分析仪测定壳聚糖-pHEV23粒径、Zeta电位；紫外分光光度计检测包封率；凝胶阻滞实验分析壳聚糖和pHEV23的聚合：DNase Ⅰ的保护试验分析壳聚糖-pHEV23的抵抗核酸酶降解能力；释放实验评价壳聚糖-pHEV23的稳定性。结果：制备的壳聚糖-pHEV23粒径在170～470nm，其中壳聚糖（低）-pHEV23 171．6nm，壳聚糖（中）-pHEV23 387．0nm，壳聚糖（高）-pHEV23 467．3nm。壳聚糖（低）-pHEV23 Zeta电位为＋22．9mV。包封率均〉95％，其中壳聚糖（低）-pHEV23 95．8％，壳聚糖（中）-pHEV23 96．7％，壳聚糖（高）-pHEV23 97．1％。凝胶阻滞分析表明，壳聚糖和pHEV23之间通过静电作用完全结合，纳米粒带正电荷。DNase Ⅰ保护试验表明，壳聚糖-pHEV23能有效抵抗DNase Ⅰ酶降解，对pHEV23有保护作用。稳定性试验表明，4℃保存60d，纳米粒仍能较稳定地包裹pHEV23。结论：壳聚糖-pHEV23能高效装载外源DNA，稳定性良好，并保护其免受核酸酶的降解。

Preparation and characterization of chitosan-pHEV23 nanoparticles