内皮细胞 miR-27b-3调控YAP信号参与脓毒症中的机制研究

【摘要】目的 探究miR-27b-3p对YAP信号的调控及其在脓毒症发生发展中的作用。方法 将小鼠按照随机数列法均分为4组，分别为对照组， CLP（盲肠结扎穿孔）组，mimic NC组，miR-27b-3p mimic组。利用CLP（盲肠结扎穿孔）法构建小鼠脓毒症模型， miR-27b-3p组小鼠通过尾静脉注射miR-27b-3p mimic，对mimic NC组小鼠尾静脉注射mimic NC阴性对照物。分离小鼠原代肺内皮细胞，qRT-PCR（荧光定量PCR）检测细胞中YAP（是相关蛋白1）、ICAM（细胞间粘附分子）、E-selectin（选择素）miR-27b-3p mRNA水平；数据库PITA预测调控YAP的miRNA；WB检测细胞中YAP、ICAM、E-selectin表达及p65活化水平；ELISA检测细胞上清中TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)水平。 结果 与对照组相比，CLP组小鼠原代肺内皮细胞中YAP、ICAM、E-selectin mRNA表达明显升高（P＜0.05），miR-27b-3p表达明显下调（P＜0.05）；数据库PITA预测miR-27b-3p与YAP mRNA 3’ UTR序列存在6个完全互补配对碱基UGUGAA；WB结果显示，与对照组相比，CLP组YAP、ICAM、E-selectin等蛋白水平明显升高，同时p-p65磷酸化活化水平明显升高；与mimic NC组相比，miR-27b-3p mimic组YAP表达量明显下调，ICAM、E-selectin表达水平明显升高，同时p65磷酸化水平升高；ELISA结果显示，与对照组相比，CLP组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6水平升高（P＜0.05） ；与mimic NC组相比，miR-27b-3p mimic组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6的含量明显升高（P＜0.05）。结论 miR-27b-3p在脓毒症血管内皮细胞中低表达，而YAP在内皮中高表达。脓毒症诱导内皮低表达miR-27b-3p，促进YAP在脓毒症内皮细胞中进一步高表达，从而抑制负向反馈调控内皮炎症信号活化。

Study on the mechanism of endothelial cell miR-27b-3 regulating YAP signal and participating in sepsis