金丝桃苷激活Sirt1/AMPK自噬通路改善糖尿病骨质疏松大鼠骨代谢和骨结构的机制研究

目的探讨金丝桃苷（HYP）对2型糖尿病性骨质疏松症（T2DOP）大鼠骨质疏松的影响及机制。方法雌性SD大鼠采用高糖、高脂饮食联合低剂量（30mg/kg）链脲佐菌素和双侧卵巢切除术建立T2DOP模型,建模后分为模型组（T2DOP组）、低剂量（50mg/kg）HYP（L-HYP）组、高剂量（100mg/kg）HYP（H-HYP）组和HYP+Sirt1抑制剂EX-527组（100mg/kgHYP+1mg/kgEX-527）,每组12只;另取12只大鼠为正常对照（NC）组。给予相应的药物干预3个月后,检测大鼠体重、空腹血糖（FBG）、血清脂质［总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）］及骨代谢标志物［抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、I型前胶原氨基端原肽（PINP）、骨钙素（OCN）和I型胶原交联羧基末端肽（CTX-I）］水平;评估骨生物力学特性和骨微结构;苏木精-伊红染色检测骨组织形态学变化;免疫组织化学染色检测骨组织中微管相关蛋白1轻链3（LC3）和beclin-1的表达;RT-qPCR和Westernblot分析LC3、beclin-1、p62和沉默信息调节因子1（Sirt1）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路相关分子的mRNA和蛋白表达。结果与NC组相比,T2DOP组大鼠的体重、血清PINP和OCN水平、最大载荷和弹性模量、骨密度（BMD）、骨连接密度（Conn.D）、骨小梁数（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、LC3mRNA表达水平、beclin-1mRNA表达水平、Sirt1mRNA表达水平、AMPKmRNA表达水平、LC3蛋白表达水平、beclin-1蛋白表达水平、Sirt1蛋白表达水平、LC3-II/LC3-I比值和p-AMPK/AMPK比值显著降低,FBG、TC、TG、LDL-C、TRACP-5b、CTX-I、骨小梁间隔（Tb.Sp）、p62mRNA表达水平、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达水平和p-mTOR/mTOR比值显著升高（P<0.05）;与T2DOP组相比,L-HYP组和H-HYP组大鼠体重、血清PINP和OCN水平、最大载荷和弹性模量、BMD、Conn.D、Tb.N、Tb.Th、LC3mRNA表达水平、beclin-1mRNA表达水平、Sirt1mRNA表达水平、AMPKmRNA表达水平、LC3蛋白表达水平、beclin-1蛋白表达水平、Sirt1蛋白表达水平、LC3-II/LC3-I比值和p-AMPK/AMPK比值显著升高,FBG、TC、TG、LDL-C、TRACP-5b、CTX-I、Tb.Sp、p62mRNA表达水平、mTORmRNA表达水平和p-mTOR/mTOR比值显著降低（P<0.05）,且H-HYP组优于L-HYP组（P<0.05）;EX-527可消除HYP对自噬的诱导作用,并减弱HYP对T2DOP大鼠骨代谢和骨微结构的改善作用。结论HYP可缓解T2DOP大鼠的血脂和血糖失调,进而改善骨代谢和骨微结构,其作用机制可能与激活Sirt1/AMPK信号通路,促进自噬有关。