轮状病毒NSP4胞质区在杆状病毒系统的表达及其黏膜佐剂效应评价

目的：应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒（RV）非结构蛋白NSP4的胞质区（CF）片段（47～175 aa），并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法：将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1，转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体介导Bac-NSP4-CF转染sf9细胞，收获细胞并传代培养。测定病毒滴度，Western blot检测目的蛋白表达情况。纯化后的重组NSP4-CF与卵清蛋白（OVA）滴鼻共免疫小鼠，并检测其黏膜免疫佐剂效应。结果：在杆状病毒系统中成功获取了NSP4-CF重组蛋白，Western blot检测可见约16 kD的特异性条带；重组NSP4-CF与OVA共免疫小鼠后，小鼠血清OVA特异性IgG、IgA抗体水平与肠道SIgA水平较OVA单独免疫组均有升高（P<0.05）;ELISPOT检测结果表明NSP4-CF佐剂组（5μg）分泌IFN-γ的脾细胞平均数均高于OVA组（P<0.05）。结论：经昆虫细胞表达系统可获得RV NSP4胞质区（47～175 aa）重组蛋白，该蛋白与模式抗原经黏膜途径免疫小...