| 体外三步法诱导胚胎干细胞定向生成神经干细胞的实验研究 |
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| 引用本文： | 周玉峰,方峰,付劲蓉,董永绥,李革,甄宏,易文龙,向稚丹. 体外三步法诱导胚胎干细胞定向生成神经干细胞的实验研究[J]. 中华神经外科杂志, 2005, 21(7): 398-402 |
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| 作者姓名： | 周玉峰 方峰 付劲蓉 董永绥 李革 甄宏 易文龙 向稚丹 |
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| 作者单位： | 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科临床病毒研究室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30070928) |
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| 摘 要： | 目的 探讨体外定向诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)生成高纯度神经干细胞(neural stem cells，NSCs)的方法。方法 模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境，以脑星形胶质细胞为支持细胞，用全反式维甲酸(All-trans retinoic acid，ATRA)等分三阶段诱导ESCs定向生成NSCs。形态学观察及畸胎瘤形成试验对ESCs的全能性进行鉴定；形态学观察结合免疫组织化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志OCT-4和神经干细胞标志Nestin蛋白和(或)基因表达对诱导全过程进行动态监测；NSCs分化试验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测。结果(1)体外培养的小鼠ESC-D3细胞在胚胎成纤维饲养层细胞上连续传代培养，仍保持向三胚层分化的能力；(2)随着诱导的进行，OCT-4表达逐渐减弱并消失，而Nestin表达逐渐增强，经三步法最终可诱导形成纯度高达90％以上的Nestin阳性细胞；(3)所诱导生成的细胞在NSCs选择性培养基中反复传代，仍表现为Nestin阳性和具有生成神经球的能力，在含血清培养基中可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞。结论采用星形胶质细胞作为诱导基质，模拟体内神经分化过程的三步诱导法，可诱导ESCs生成较高纯度的NSCs，并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力。
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| 关 键 词： | 神经干细胞 胚胎干细胞 三步法 实验研究 Nestin蛋白 RT-PCR检测 Nestin表达 星形神经胶质细胞 脑星形胶质细胞 NSCs cells 形态学观察 体外定向诱导 全反式维甲酸 ESCs 免疫组织化学 选择性培养基 含血清培养基 少突胶质细胞 |
| 修稿时间： | 2004-12-27 |
The study of efficient production of neural stem cells from embryonic stem cells in vitro by three-step differentiation |
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| ZHOU Yu-feng,FANG Feng,FU Jin-rong,et al.. The study of efficient production of neural stem cells from embryonic stem cells in vitro by three-step differentiation[J]. Chinese Journal of Neurosurgery, 2005, 21(7): 398-402 |
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| Authors: | ZHOU Yu-feng FANG Feng FU Jin-rong et al. |
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| Affiliation: | ZHOU Yu-feng,FANG Feng,FU Jin-rong,et al. Department of Pediatrics,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Embryonic stem cell (ESCs) Neural stem cells (NSCs) Astrocyte |
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