| 人主动脉瓣间质细胞原代培养及体外钙化模型的建立 |
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| 引用本文： | 张米,刘晓红,张伯尧,韩林,陆方林,张锡武,龚德军,徐志云.人主动脉瓣间质细胞原代培养及体外钙化模型的建立[J].第二军医大学学报,2013,34(5):488-492. |
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| 作者姓名： | 张米 刘晓红 张伯尧 韩林 陆方林 张锡武 龚德军 徐志云 |
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| 作者单位： | 第二军医大学长海医院胸心外科,上海,200433 |
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| 基金项目： | 上海市基础研究重点项目(11JC1415900). |
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| 摘 要： | 目的原代培养人主动脉瓣间质细胞并建立体外瓣膜细胞钙化模型,诱导人主动脉瓣间质细胞向成骨细胞分化,并观察其表型变化。方法采用胶原酶两次消化法原代培养人主动脉瓣间质细胞,取传代3～7代间质细胞,随机分为2组,实验组以钙化诱导培养基培养,对照组以标准培养基培养。1周后,行von Kossa染色观察钙化结节形成情况,分光光度计测定碱性磷酸酶活性,免疫荧光染色检测瓣膜间质细胞表型蛋白,real-time PCR及蛋白质印迹分析检测成骨相关因子的表达,评价模型建立情况。结果培养1周后实验组出现钙化结节,每孔钙化结节数量(51.20±14.31)个]高于对照组(3.60±1.82)个],差异有统计学意义(P<0.05),同时实验组碱性磷酸酶活性较对照组升高(约上升4倍,P<0.05),细胞收缩表型平滑肌肌动蛋白(α-SMA)增高。Real-time PCR及蛋白质印迹分析提示,实验组中成骨相关因子Runx2、osteocalcin及osteopontin在mRNA及蛋白水平均较对照组升高,磷酸化Smad1/5/8蛋白表达也同时升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了人主动脉瓣间质细胞体外诱导钙化模型,诱导后间质细胞呈现相对激活状态,表型向收缩表型和成骨表型转化,为今后实验提供了可靠的细胞模型。
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| 关 键 词： | 主动脉瓣 间质细胞 细胞培养技术 细胞表型 |
| 收稿时间： | 2013/3/11 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/3/29 0:00:00 |
Primary culture and in vitro calcification model establishment of human aortic valve interstitial cells |
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| ZHANG Mi,LIU Xiao-hong,ZHANG Bo-yao,HAN Lin,LU Fang-lin,ZHANG Xi-wu,GONG De-jun and XU Zhi-yun.Primary culture and in vitro calcification model establishment of human aortic valve interstitial cells[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2013,34(5):488-492. |
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| Authors: | ZHANG Mi LIU Xiao-hong ZHANG Bo-yao HAN Lin LU Fang-lin ZHANG Xi-wu GONG De-jun and XU Zhi-yun |
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| Institution: | Department of Cardiothoracic Surgery, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China*Corresponding author. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | aortic valve stromal cells cell culture techniques phenotype |
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