一种心肌细胞内钙调素定位定量的测定方法

钙调素(Calmodulin CaM)是一种分子量小、结构简单、分布广泛并具有多种功能的Ca~2调节蛋白.了解CaM在组织中的分布特征对于探讨CaM的功能具有重要意义.但仅仅利用免疫胶体金标记技术,从二维图像上金颗粒的分布来推测CaM的定量分布特征、结果是不准确的.我们在对人右心室肌细胞GaM定位定量测定中,采用了一种将兔疫胶体金标记技术与细胞形态立体定量学相结合的方法.我们认为该方法结果可靠,能较好地反映细胞内CaM的相对含量.有较好的实用性,现介绍如下:1 材料与方法1.1 材料 先天性心脏病室间隔缺损患者4例.男2例,女2例.年龄6～8岁,平均7.15岁.术前心电图均属正常范围,X线胸片心胸比为0.48±0.02.手术证实缺损均为嵴下型,缺损直径均≤5mm.心脏手术中自右心室切口处取2mm~3心肌组织若干块,经3%戊二醛予固定.1%四氧化锇后固定,梯度脱水,Enpon 812包埋,每个病例取5个包埋块,各切2张超薄切片并分别覆于铜网和不锈钢网上.