ERα基因shRNAi慢病毒载体的构建与滴度测定

目的：构建ERα基因RNAi慢病毒载体,检测病毒感染细胞的滴度。方法：针对已经筛选确定的ERα基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经Age I和EcoRI 酶切后的pGCsil-GFP载体［含U6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）］连接产生shERα-LV慢病毒载体，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。 用shERα-LV载体、pHelper 1.0 载体和pHelper 2.0质粒共转染包装细胞293T细胞，包装产生慢病毒，以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结论：PCR和测序证实，成功构建ERα shRNA的慢病毒载体shERα-LV. 包装慢病毒，浓缩病毒悬液的滴度为2E+8TU/ml。讨论：成功构建人ERα基因RNAi慢病毒载体，为ERα在乳腺癌发生发展中的研究提供了工作基础。