百草枯对A549细胞中解整合素-金属蛋白酶17表达的影响

目的构建体外百草枯（paraquat，PQ）细胞纤维化模型，观察PQ对A549细胞中解整合素-金属蛋白酶17（ADAM17）表达的影响，探讨ADAM17在PQ中毒致肺纤维化中的作用。方法体外培养A549细胞，分为正常对照组、不同浓度PQ组，应用CCK-8检测细胞活力，筛选PQ浓度和时间，显微镜下观察细胞形态，ELISA测定各组纤维化标志物I型胶原（type I collagen，Col I）和纤连蛋白（fibronectin，FN）的表达，建立细胞纤维化模型；免疫细胞化学检测A549细胞中ADAM17的分布情况，RT-PCR和Western blot分别半定量检测ADAM17 mRNA及蛋白水平的表达情况。结果（1）随着PQ浓度增加及作用时间延长，A549细胞活力呈下降趋势，差异有统计学意义（P〈0.05），呈剂量依赖性和时间依赖性。（2）正常的A549细胞融合呈铺路石样生长，排列比较紧密，经PQ诱导后细胞排列较松散，细胞间连接变疏松，部分细胞溶解、死亡。（3）ELISA显示，随PQ浓度增加，Col I和FN表达增强，差异有统计学意义（P〈0.05）；随PQ时间延长，Col I和FN表达也逐渐增强，差异有统计学意义（P〈0.05），成功建立PQ细胞纤维化模型。（4）免疫细胞化学显示，ADAM17在A549细胞胞浆表达。（5）RT-PCR和Western blot表明，随着PQ浓度增加，ADAM17 mRNA及蛋白水平表达明显增加，差异有统计学意义（P〈0.05），以PQ 200 umol/L时最为明显。随着PQ作用时间延长，ADAM17 mRNA及蛋白表达水平也明显增加，差异有统计学意义（P〈0.05），在24 h达到高峰。结论百草枯可引起肺泡上皮细胞形态学改变，导致细胞损伤，成功建立细胞的纤维化模型，对A549细胞的毒性作用具有剂量和时间依赖性。ADAM17在PQ诱导的A549细胞中过表达，可能参与了百草枯诱导的肺纤维化过程。

Effect of paraquat on the expression of a disintegrin and metalloproteinase-17 in A549 cells

Fang Wenyan;Lin Changwei;Wang baofu;Feng Shenggang(Graduate School of Luzhou Southwest Medical University, Luzhou 646000, Chin)