鞘内注射钩吻素子对骨癌痛小鼠行为学及脊髓背角胶质细胞活化的影响

目的 探究鞘内注射钩吻素子对骨癌痛（BCP）小鼠行为学和脊髓背角胶质细胞活化的影响。
方法 实验一：选择雄性SPF级C57BL/6小鼠36只，4～6周龄，体重18～22 g。采用随机数表法将小鼠分为两组：假手术1组（S₁组）和BCP₁组，每组18只。S₁组向右侧股骨远端骨髓腔注入PBS溶液10 μl，BCP₁组向右侧股骨远端骨髓腔接种含有2×10⁵个Lewis肺癌细胞的PBS溶液10 μl建立BCP模型。于建模前1 d、建模后4、7、10、14、21 d每组随机取6只小鼠测定含机械缩足阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）。于建模后7、14、21 d完成行为学测试后每组随机处死6只小鼠，取小鼠脊髓腰膨大处，采用Western blot法检测脊髓星形胶质细胞标记蛋白（GFAP）和小胶质细胞标记蛋白（Iba-1）含量。取小鼠右侧股骨行HE染色进行骨组织病理学检查。实验二：选择雄性SPF级C57BL/6小鼠54只，4～6周龄，体重18～22 g。采用随机数表法将小鼠分为三组：假手术2组（S₂组）、BCP₂组和BCP+钩吻素子组（K组），每组18只。S₂组和BCP₂组处理同S₁组和BCP₁组，K组向右侧股骨远端骨髓腔接种含有2×10⁵个Lewis肺癌细胞的PBS溶液10 μl建立BCP模型，建模后14 d向小鼠L_4-5或L_5-6间隙缓慢鞘内注射含钩吻素子30 μg的20% DMSO溶液5 μl。给药前1 h、给药后1、2、3 h每组随机取6只小鼠测定MWT和TWL。给药后1 h时每组随机处死12只小鼠，采用Western blot法检测脊髓GFAP和Iba-1蛋白含量，ELISA法检测脊髓IL-6、IL-1β和TNF-α浓度。
结果 实验一：与S₁组比较，BCP₁组建模后7、10、14、21 d MWT明显降低、TWL明显缩短（P<0.05），建模后7、14、21 d脊髓GFAP和Iba-1蛋白含量均明显升高（P<0.05）。HE染色示S₁组无骨质破坏，骨髓腔内为正常骨髓细胞；BCP₁组骨质遭破坏，骨小梁、骨髓腔和周围软组织内大量Lewis肺癌细胞浸润。实验二：与S₂组比较，BCP₂组给药前1 h、给药后1、2、3 h MWT均明显降低、TWL均明显缩短（P<0.05），给药后1 h脊髓GFAP、Iba-1蛋白含量、脊髓IL-6、IL-1β和TNF-α浓度均明显升高（P<0.05）；K组给药前1 h、给药后3 h时MWT明显降低（P<0.05）、TWL明显缩短（P<0.05）。与BCP₂组比较，K组给药后1、2 h时MWT均明显升高（P<0.05）、TWL均明显延长（P<0.05），给药后1 h脊髓GFAP、Iba-1蛋白含量、脊髓IL-6、IL-1β和TNF-α浓度均明显降低（P<0.05）。给药后1 h S₂组和K组脊髓GFAP和Iba-1蛋白含量、脊髓IL-6、IL-1β和TNF-α浓度差异均无统计学意义。
结论 鞘内注射钩吻素子通过抑制星形胶质细胞和小胶质细胞活化可减轻神经炎症反应，缓解骨癌痛小鼠疼痛。

Effects of intrathecal injection of koumine on behavior and activation of glial cells in spinal dorsal horn of mice with bone cancer pain