循环血小板活化与血小板-白细胞黏附的流式细胞分析法及其应用

目的建立流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析循环血小板活化(circulating platelet activation,CPA)与血小板-白细胞黏附(platelet-leukocyte adhesion,PLA)方法,为临床开展血小板相关疾病研究奠定基础。方法选择50例健康志愿者,收集枸橼酸钠抗凝血,采用CD61/PAC-1/CD62P三色法检测CPA,分析血小板早期活化率(PAC-1~+CD62P~-)和晚期活化率(PAC-1~+CD62P~+);并设置0、5、10、15、20、30、60 min 7个时间点染色,分析样本放置时间对血小板活化的影响,建立参考值。采用CD61/CD3/CD19/CD11b/CD14/CD45六色法检测PLA,分析血小板一白细胞黏附CD45~+CD61~+(PLA)、血小板-T淋巴细胞黏附CD3~+CD61~+(PTLA)、血小板-B淋巴细胞黏附CD19~+CD61~+(PBLA)、血小板-单核细胞黏附CD14~+CD61~+(PMA)、血小板-中性粒细胞黏附CD45~(low+)CD11b~+CD61~+(PNA)表达率。结果宜选用15 min点建立健康人血小板活化参考范围,早期活化百分比为:3.75(1.00~9.80)%,晚期活化百分比为:0.10(0.00~0.10)%;FCM检测PIA、PTLA、PBLA、PMA、PNA表达率,其中PMA比例最高为:(10.75±3.23)%。结论 CPA检测血样放置时间不应超过15 min,PLA检测关键在于PMA分析。建立快速、稳定、准确的CPA和PLA检测方法是正确评价血小板功能的技术保障。

Flow cytometry for assessing circulating platelet activation and platelet-leukocyte adhesion