| 摘 要： | 血液乳酸含量的测定在机体代谢的研究中,具有相当重要的意义。在临床观察及诊治过程中,血液乳酸浓度不仅作为组织含氧状况的判断指标,而且还用于辨别酸碱失衡的原因。近来还有人将其浓度的变化作为估计休克预后的一个重要指标。乳酸测定方法,有紫外分光法、Hoggman改良法和酶催化反应测定法。前两类方法操作萦杂并且费时,故在实际应用上要受到许多限制。而Julse Maequeen等介绍的微量快速雄催化反应测定法简便而快速,但某些试剂需从国外进口,使推广受到影响。根据我国的条件,我室对Julie Maequeen法作了改进,效果很好,现介绍如下。原,理血液中的乳酸,在乳酸脱氢酶的作用下,使辅酶l(NAD)转变成还原型辅酶I(NADH),还原型辅酶I使甲硫吩嗓(PMs)转变成还原型甲硫吩嗓(PMSH),还原型甲硫吩嗓使硝基四氮哇蓝转变成还原型硝基四氮噢蓝而呈紫色。其颜色深浅与乳酸浓度成正比。试剂、Ti 15一IIC;反:,i·夜(。.IM.pHS.6),称取Tris(三怨甲基氨墓甲烷)6'0579,溶于400ml蒸馏水i勺,用ZN盐酸调至PHS.凌~8.6,然后加蒸馏水至500ml,放冰箱保存。一二、显色剂。溶解75;ng NBT、7.smsPMs及soomgNAo在魂oml燕馏水内,济化后再用蒸馏水稀释至50ml,放冰箱保存。三、助溶剂。取聚氧乙烯月桂醚3.oml,加蒸馏水至100ml。四、乳酸脱氢酶。五、0.IM盐酸。六、守昆合试剂。loml缓冲液,2 ml显色剂,1 ml助溶剂,130 Iu乳酸脱氢酶。此混合试剂临用前配制。七、标准液。40ms肠乳酸锉水济液。操作一、将空自管、对照管、测定竹、标准管各加入2.Oml棍合试剂,放37℃水浴保温5~10分钟。二、保温后分别在空白管中加o.02ml蒸馏水,测定管中加0.02ml标本,标准管中加。.02ml标准液。再放置37℃水浴中10分钟。然后在空白、对照,测定及标准四管中各加入2.0ml 0 .IM盐酸,混匀后在对照竹中加入标本0.02ml混合。以空自竹调零点,540::。波长比色,读取各管光密度。计算。.'__'、_测定管光密度一对照管光密度乳酸(m:哟一~且捺淮眷端犷些,-0 .0080 .002X 100X0.93 也可先制作标准曲线,然后在坐标上查出乳酸的浓度。绘制标准曲线的方法如下:称取107.7mg乳酸锤,加入蒸馏水至leoml使成IOOmg肠乳酸标准液,再将其稀释为10mg肠、20mg帕、40mg肠及50mg帕的乳酸标准液,然后按上述测定步聚操作,测得各种浓度的标准液的光密度,于坐标纸_L绘出标准曲线。本实验操作时应注意以下几点:①抽血时不能使用压脉带捆束:②采血后标本应立即送检,在冰箱放置可稳定一小时,如单独测定乳酸,最好用含氟化钠的抗凝剂;③配显色剂时,应先将NBT溶于少量沸水中,待冷却后再加入PMs及NAD,最后加蒸馏水至足量,④标准液的乳酸锉换算成乳酸,应乘以校正常数。.93。实验结果一、重复性试验结果见表l。表l重复性试验次数血浆乳徽(mg肠)血狱斗20二g肠乳酸标准(mg肠)3838"37 38 39 39 38 3738·8.l 18 l8 l8 19 l8 l9 19 18 18 101 2 3 .B 671--8·4艺。811 .94表2回收试验结果回收试验见表2。.。。赢标准液加t 血桨乳旅浓度lomg肠血浆 lomg肠(N二5)血浆 Zomg肠(N二5)血浆 3omg肠(N,5)回收率1 08.5肠1 02.0肠 95.0肠 X=101.8肠侧口口。口..自门加.口....三、相关试验结果见附图。四、正常值我室测定36名正常人的动脉血浆乳酸值,其结果平均值为13.5±7.2mg％(6.3～20.7mg％)。蜇襄兽黉警《。。口Hoy9"An段盘聩附图一…本文介绍的乳酸测定方法,具有简便,快速的特点,与Hoggman改良法作对比,呈高度正相关,本法重复性、回收率也较理想,所需比色仪器一般基层医院均具备,又采用罔产试
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