密码子优化人PD-L1基因在巴斯德毕赤酵母中的表达与鉴定

目的 利用巴斯德毕赤酵母获得具有可溶性、免疫原性的重组PD-L1蛋白。方法 根据巴斯德毕赤酵母表达系统的密码子使用偏好，优化人PD-L1基因序列，将优化后的序列构建至质粒pPIC9K,合成重组质粒pPIC9K-PDL1。使用SacⅠ-HF将pPIC9K-PDL1线性化，然后通过电击法将pPIC9K-PDL1上的PD-L1基因序列整合至巴斯德毕赤酵母基因组中，依次使用MD平板(无组氨酸)和遗传霉素G418从电击处理过的菌液中筛选重组巴斯德毕赤酵母菌株，然后使用PCR和测序对筛选到的菌株进行鉴定。利用甲醇体积分数为0.005的BMMY培养基诱导重组巴斯德毕赤酵母菌株表达，使用免疫印迹法检测菌株培养基上清液中的表达产物。结果 筛选得到了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株，表达的PD-L1相对分子质量约为44 700,可以与抗PD-L1抗体特异性结合。结论 成功构建了稳定表达PD-L1蛋白的重组巴斯德毕赤酵母菌株，菌株表达的PD-L1蛋白可用于开发血清PD-L1检测试剂盒。