姜黄素对小鼠肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对小鼠肝癌Hepa1-6细胞体外增殖和凋亡的影响。方法 取处于对数生长期的Hepa1-6细胞,随机分为对照组、10μmol/L组、20μmol/L组和40μmol/L组,分别采用0、10、20、40μmol/L的姜黄素进行干预,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。RT-qPCR法检测Hepa1-6细胞中凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3及Toll样受体2(TLR2)、IFN-α、IFN-β基因表达。ELISA法检测Hepa1-6细胞培养上清IFN-Ⅰ。对照组、40μmol/L组中Hepa1-6细胞分别与CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞共孵育,流式细胞术检测CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞CD69表达。结果 10、20、40μmol/L组Hepa1-6细胞增殖抑制率呈剂量依赖性增加,抑制率依次为(36.45±2.11)%、(46.40±2.08)%、(82.16±3.32)%,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);10、20和40μmol/L组Hepa1-6细胞凋亡比例分别为10.47%、26.66%和49.81%,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。RT-qPCR结果显示,10、20和40μmol/L组中抗凋亡基因Bcl-2转录水平分别是对照组的(0.77±0.06)倍、(0.44±0.06)倍和(0.25±0.08)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);同时,促凋亡基因Caspase-3表达增高,10、20和40μmol/L组中促凋亡基因Caspase-3转录水平分别是对照组的(1.73±0.31)倍、(2.52±0.45)倍和(3.25±0.20)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。随姜黄素浓度的增加,TLR2转录水平逐渐升高,10、20和40μmol/L组TLR2转录水平分别是对照组的(3.56±0.59)倍、(4.93±0.04)倍和(6.60±0.47)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);10、20和40μmol/L组IFN-α转录水平升高,分别为对照组的(4.21±0.22)倍、(5.54±0.39)倍和(8.05±0.93)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);IFN-β转录水平分别为对照组的(3.08±0.51)倍、(5.31±0.55)倍和(8.35±0.59)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-α水平分别为(57.00±8.8)、(82.47±4.42)、(100.37±8.99)pg/mL,对照组为(36.26±6.12)pg/mL,10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-α水平高于对照组(P均<0.01);10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-β水平分别为(60.67±6.81)、(91.33±5.51)、(144.00±10.15)pg/mL,对照组为(44.67±1.15)pg/mL,10、20和40μmol/L组细胞分泌IFN-β水平高于对照组(P均<0.01)。对照组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞表达CD69水平分别为(24.53±1.39)%、(23.40±2.32)%、(32.33±3.08)%,40μmol/L组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞表达CD69水平分别为(39.90±3.51)%、(31.47±3.88)%、(50.83±4.74)%,对照组与40μmol/L组CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞CD69水平比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 姜黄素通过调控TLR2分子表达,促进IFN-Ⅰ分泌,从而抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,同时促进免疫细胞活化。