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| 人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达 | |
| 引用本文： | 黄方敏,郑启新,吕斌,鲍同柱. 人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达[J]. 华中科技大学学报(医学版), 2004, 33(2): 165-168 |
| 作者姓名： | 黄方敏 郑启新 吕斌 鲍同柱 |
| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科,武汉,430030 2. 华中科技大学公共卫生学院环境医学研究所,武汉,430030 3. 湖北省宜昌市中心医院骨科,宜昌,443003 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No.30 2 0 0 0 6 1) |
| 摘 要： | 目的：构建人共刺激分子CD80(B7-1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3)融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法：采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281bp)．此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7-1 cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1，测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达。结果：构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7sart3／pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致．阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强．免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应，融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当。结论：成功构建真核表达载体B7Sart3／pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。 |
| 关 键 词： | Sart3基因 B7基因 克隆 基因表达 RT-PCR技术 共刺激分子 肿瘤疫苗 |
| 修稿时间： | 2003-10-27 |
Cloning and Expression of hB7-1/Sart3 Fusion Protein |
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| Huang Fangmin ,Zheng Qixin ,Lv Bin et al. Cloning and Expression of hB7-1/Sart3 Fusion Protein[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Health Sciences), 2004, 33(2): 165-168 | |
| Authors: | Huang Fangmin Zheng Qixin Lv Bin et al |
| Affiliation: | Huang Fangmin 1,Zheng Qixin 1,Lv Bin 2 et al 1 Department of Orthopeadics,Union Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430022 2 Institute of Environmental Medicine,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030 |
| Abstract: | |
| Keywords: | Sart3 gene B7 gene gene cloning gene expression |
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