hTERT和GFAP双启动子条件复制腺病毒介导放射性碘治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 利用条件复制腺病毒Ad-Tp-E1a-Gp-NIS感染脑胶质瘤细胞，探讨其介导靶向性放射性碘治疗脑胶质瘤的可行性。方法 克隆人端粒反转录酶（hTERT）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子，荧光素酶分析法检测启动子启动效率。构建并纯化条件复制腺病毒Ad-Tp-E1a-Gp-NIS，进行肿瘤选择性病毒复制实验。U87和U251细胞感染Ad-Tp-E1a-Gp-NIS后，进行Western blot分析蛋白质表达，¹²⁵I内流及外流和¹³¹I克隆形成实验。结果 荧光素分析实验证明，hTERT和GFAP启动子分别可以引导荧光素蛋白在U251和U87细胞中表达，表达效率为37.31%~49.00%（F=5.87，P<0.05）和59.75%~62.10%（F=11.89，P<0.01）。Ad-Tp-E1a-Gp-NIS能够在hTERT阳性和GFAP阳性实现肿瘤选择性复制，且在GFAP启动子引导下能成功表达hNIS基因。Western blot分析表明，hTERT蛋白和GFAP蛋白在U87和U251细胞中显示出相对分子质量为120×10³和49×10³的条带。感染Ad-Tp-E1a-Gp-NIS后，U87细胞摄碘能力提高78.80倍（F=2 914.58，P<0.01），U251细胞摄碘能力提高92.48倍（F=2 275.91，P<0.01）。体外细胞克隆分析证明，感染病毒并在¹³¹I中孵育12 h后，超过90%的肿瘤细胞被杀死，而对照组细胞仅有65%（t=11.73~78.33，P<0.01）。结论 Ad-Tp-E1a-Gp-NIS能实现条件性复制并具有明确的肿瘤靶向性。在细胞水平实验中，能引导放射性¹³¹I杀死胶质瘤细胞。