实时荧光定量RT-PCR鉴定溶血对血清microRNA测定的影响

目的监测miR-16基因受溶血的影响程度,确定miR-16作为可靠内参用于分析的溶血范围。方法建立红细胞体积比为0、0.040%、0.012%、0.037%和0.110%的溶血标本体系;运用全波长光谱分析确定关于溶血的特征性吸收波长;建立定量测定miR-16的标准曲线;运用实时荧光定量RT-PCR法测定溶血体系中miR-16的表达量。结果与溶血相关的特征性吸收峰位于414 nm;miR-16测定的标准曲线公式为:y=-1.21x+34.635,决定系数R2为0.9988。在溶解红细胞体积小于0.012%的血清标本中,miR-16作为血清micro RNA(miRNA)的内参是可靠的。此时,血清的A414测定值为0.19。结论建立了监测血清标本中miR-16可作为可靠内参基因的溶血范围,确保了标本的可靠性和实验结果的准确性。