H1N1亚型流感病毒mRNA候选疫苗的构建、表达及鉴定

目的 从mRNA序列优化和体外转录(IVT)系统优化角度，设计2条基于血凝素(HA)基因的抗H1N1亚型流感病毒mRNA疫苗，分别连接到3种体外转录系统(含不同UTRs序列)中进行候选疫苗抗原的表达及鉴定，并确定候选疫苗所使用的最佳体外转录系统。方法 确保抗原基因(HA)氨基酸序列不变，以2种优化策略对HA基因的密码子进行优化，分别命名为JLH1HA和JLHA,并分别克隆至骨架载体pGEM-T7-Hα(UTRs来自人源α球蛋白)、pGEM-T7-Mα(UTRs来自鼠源α球蛋白)、pGEM-n3(UTRs来自人源β球蛋白)上，通过线性化处理、体外转录、纯化及Cap1加帽处理，获得功能性mRNA,转染A549细胞后通过Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白的表达。结果 成功构建6组mRNA候选疫苗且均能表达抗原蛋白，以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统蛋白表达量较高。结论 抗原的设计具有可行性，筛选出的最优体外转录系统为以pGEM-T7-Hα为骨架载体构建的体外转录系统。密码子优化对蛋白表达量的影响并不显著，可能在动物免疫效果上能够体现。