淡色库蚊抗性转录因子FTZ-F1蛋白原核表达与鉴定

目的 对淡色库蚊抗性转录因子FTZ-F1蛋白进行原核表达并鉴定。方法 对转录因子FTZ-F1蛋白进行生物信息学分析，包括蛋白的理化性质，二级结构及三维同源模型。采用PCR技术扩增FTZ-F1基因，比对分析后选取FTZ-F1基因保守区和功能区片段，片段长度为1122bp,然后将其连接至pET-32a(+)载体，构建重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1,再转化入感受态细胞BL21(DE3)后用IPTG诱导重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1的表达，运用SDS-PAGE和Western blot初步鉴定重组蛋白FTZ-F1的表达，采用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化和增加蛋白的量，用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白FTZ-F1的表达。结果 FTZ-F1蛋白有744个氨基酸，相对分子质量为79.57×10³。1%琼脂凝胶鉴定PCR扩增为单一条带，大约为2 240 bp,测序结果表明重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1构建正确。采用SDS-PAGE检测重组蛋白FTZ-F1,结果表明蛋白FTZ-F1在原核表达系统中主要以可溶...