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人白细胞介素-10和Bcl-2基因重组腺病毒经冠状动脉转染大鼠心肌的可行性
引用本文:杨昭云,徐军美,姜金玉,郭亮,廖用琼,钱其军. 人白细胞介素-10和Bcl-2基因重组腺病毒经冠状动脉转染大鼠心肌的可行性[J]. 中华麻醉学杂志, 2006, 26(11): 1001-1004
作者姓名:杨昭云  徐军美  姜金玉  郭亮  廖用琼  钱其军
作者单位:1. 410011,长沙市,中南大学湘雅二医院麻醉科
2. 上海新霁生物科技有限公司
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30371377)
摘    要:
目的研究人白细胞介素-10(IL-10)、Bcl-2基因重组腺病毒经冠状动脉转染大鼠心肌的可行性。方法以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2,在293细胞内分别扩增,应用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。105只雄性SD大鼠,随机分为5组: Ad-EGFP组(Ⅰ组,n=5)、PBS对照组(Ⅱ组,n=25)、Ad-hBcl-2组(Ⅲ组,n=25)、Ad.hIL-10组(Ⅳ组,n =25)、Ad-hIL-10+Ad-hBcl-2组(Ⅴ组,n=25)。采用左心室腔注射,同时阻断主动脉、肺动脉10 s的方法来实施冠状动脉转染。Ⅰ组于转染后3 d处死大鼠,取心、肝、肺、肾、脑,作快速冰冻切片,光镜下观察绿色荧光蛋白(EGFP)表达情况。其余各组于转染后1、3、7、14、28 d各随机处死5只大鼠,用ELISA法测定静脉血浆及心肌组织IL-10、Bcl-2表达水平;取心、肝、肺、肾组织,光镜下观察炎性反应;测定血常规、肝功能指标、肾功能指标及心肌酶。结果Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2经氯化铯纯化滴度分别为1.99×109、2.10×1010、1.70×1010 pfu/ml。Ⅰ组于转染后3 d心肌组织可见大量EGFP表达,其它器官未检测到EGFP的表达。Ⅲ组-Ⅴ组心肌组织目的基因蛋白含量于转染后3 d达高峰,并持续至转染后14 d,Ⅲ组、Ⅴ组心肌组织Bcl-2峰含量分别为(71.6±17.9)×104、(95.5±25.7)×104 pg/g,Ⅳ组、Ⅴ组心肌组织IL-10峰含量分别为(16.8±3.7)×104、(19.3±3.3)×104 Pg/g,Ⅲ组-Ⅴ组转染后1-14 d心肌组织目的基因蛋白含量均高于Ⅱ组,Ⅴ组转染后3d心肌组织目的基因蛋白含量高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05)。Ⅲ组-Ⅴ组血浆IL-10、Bcl-2浓度与Ⅱ组比较差异无统计学意义。光镜下各组心、肝、肺、肾组织未见明显炎症反应。与Ⅱ组比较,Ⅲ组-Ⅴ组血常规、肝功能指标、肾功能指标、心肌酶差异无统计学意义。结论重组腺病毒介导人IL-10、Bcl-2基因经冠状动脉转染大鼠后,心肌能够高效地表达目的基因蛋白,且局限在心肌内,没有产生炎性反应和免疫反应。

关 键 词:白细胞介素10 基因 bcl-2 腺病毒科 心肌 转染 冠状血管
收稿时间:2005-11-09
修稿时间:2005-11-09

Intracoronary adenovirus-mediated human IL-10 and Bcl-2 gene transfer to myocardium in rats
YANG Zhao-yun,XU Jun-mei,JIANG Jin-yu,et al.. Intracoronary adenovirus-mediated human IL-10 and Bcl-2 gene transfer to myocardium in rats[J]. Chinese Journal of Anesthesilolgy, 2006, 26(11): 1001-1004
Authors:YANG Zhao-yun  XU Jun-mei  JIANG Jin-yu  et al.
Affiliation:YANG Zhao-yun,XU Jun-mei,JIANG Jin-yu,et al. Department of Anesthesiology,Second Xiangya Hospital of South University,Changsha 410011,China
Abstract:
Keywords:Interleukin-10    Genes, bcl-2   Adenovirdae   Mycardium   Transfection   Coronary vessels
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