应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk（L）核移位机制

【目的】通过研究Syk（L）在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制，探讨Syk（L）抑制乳腺癌的可能性机制。【方法】采用细胞胞核、胞浆分离技术和Western blot的方法，检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布。构建绿色荧光蛋白（GFP）和Syk（L）核移位相关功能域融合蛋白质粒，转染入Cos7细胞内，荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的分布。【结果】BT474细胞的细胞浆中可检测到Syk（S）和Svk（L）的表达，细胞核中只检测到Syk（L）的表达。在Cos7细胞中，GFP与Syk（L）的缺失域（deletion domain，DEL域）融合蛋白均匀分布于细胞内，GFP与Syk（L）的IDB域融合蛋白聚集于细胞核中；将DEL域上的294K、300K、及305K突变域非碱性氨基酸后构建成GFP—IDB（L）-M，突变的融合蛋白则失去核聚集现象。【结论】在乳腺癌细胞中。Syk（L）可从细胞胞浆移位到细胞核内。Syk（L）的IDB域具有完整的核移位功能，能将融合的胞浆蛋白GFP转移到细胞核内；DEL域的碱性氨基酸具有核定位信号功能。Syk（L）在乳腺癌细胞中的抑癌功能与其核移位有关。